HA,小鼠透明質酸酶聯免疫試劑盒技術指導
l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中小鼠透明質酸（HA）的含量。
l 有效期：6個月
l 保存條件：2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠透明質酸（HA）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠透明質酸（HA）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
HA,小鼠透明質酸酶聯免疫試劑盒技術指導需要但未提供的材料
1. 可在450nm處進行讀數的酶標儀；
2. 能精確吸取10-200µL的移液器；
3. 可調多道（8）移液器（50－200µL）；
4. 供可調多道移液器使用的試劑存放槽；
5. 洗瓶或洗板機；
6. 蒸餾水或去離子水；
7. 1升的圓柱形量筒；
8. 移液器：1和（10或25 mL）；
9. 移液器槍頭；
10. 紙巾；
11. 計時器，用以監控溫育步驟；
12. 處理池和消毒劑（例如：0.5% 次氯酸鈉, 10% 家用漂白水）；
注意事項
1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室
溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中
不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。 9. 不能使用過期產品。
10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。
保存： 貯藏于2-8°C。
標本收集
1. 本試劑盒可使用血清、血漿、細胞培養上清液、組織液標本。
2. 室溫（20－25℃）下保存標本不要超過8小時。2－10℃保存標本，不超過48小時。如
耽擱的時間更長，請在-20℃或更低的溫度下保存標本。標本避免多次凍融，這樣可能會損失蛋白活性，產生錯誤結果。
準備工作
1. 濃縮洗滌液(20X)用雙蒸水稀釋成1X(至 500ml)。
操作步驟
試劑盒應平衡至室溫（20-25°C ）再試驗。 取出所需反應板。
1. 加入10ul標準品(Standards)、10ul標本于相應反應板孔中。
2. 每孔加入40ul Anti mouse IL-1 Biotin 和40ul Anti mouse IL-1 POD。輕輕混勻30秒，封
住板孔，室溫溫育 45分鐘。
3. 洗板：甩盡板內液體，用洗滌液洗滌反應板（每孔內加入350ul洗滌液），并去除水滴
（在厚疊吸水紙上拍干）；反復洗滌5次。
4. 每孔加入100ul顯色液， 輕輕混勻10秒，室溫溫育20分鐘。
5. 每孔加入100ul終止液（Stop Solution）。輕輕混勻30秒；30分鐘內在450nm處讀OD
值。
以OD值為縱坐標，以標準品濃度為橫坐標，繪制標準曲線。根據樣品的OD值可在標準曲線上查出其濃度。
