細胞凍存融化的原則是緩凍速融細胞凍存（慢）
1.預(yù)先配制凍存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存預(yù)冷；
2.用胰酶對細胞進行消化：倒去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基或用槍小心吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，PBS沖洗兩次，用胰酶消化細胞（盡可能溫和）；

3.將預(yù)冷的凍存液懸浮細胞，用滴管輕輕吹打混勻。

4.在每支凍存管中加入1ml細胞液，密封后標記凍存細胞名稱和凍存日期。
5.凍存步驟的細致直接關(guān)系到細胞復(fù)蘇時的活力，如果有程序降溫器（放在-80℃冰箱一整夜，放入液氮罐）；或者可以在4℃，2h；然后轉(zhuǎn)到-20℃，2h；-80℃，2h；放入液氮罐。

細胞凍存管融化（快）

1.將細胞凍存管取出，浸入37℃水浴鍋內(nèi)，輕輕晃動，注意融化，當(dāng)融得只剩一個小冰塊時，將細胞插入冰中。
2.加入4℃預(yù)冷的培養(yǎng)基，用手指輕彈懸浮細胞團。
3.250g離心10min，去除上清液，再加入培養(yǎng)基，輕輕懸浮。
4.盡量將細胞中的DMSO洗去，計數(shù)。
 
在細胞凍存過程中，所結(jié)的冰晶對細胞傷害較大，所以過程一定要慢，DMSO能減少冰晶傷害。
在細胞復(fù)蘇過程中，要快，以減少融化對細胞的傷害，其實還是冰晶的問題。DMSO浸潤的細胞非常脆弱，所以可要盡快將DMSO去除，一定要輕。

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